盡管關于病毒性肝炎的發病機理目前還有許多方面是未知的，但一些研究已經明確告訴我們，病毒在進入肝細胞后會影響肝細胞內基因表達。要想從基因層面尋找并得到那些與肝炎病毒相關的基因，基因克隆化是一種有效的途徑。在日前北京地壇醫院舉辦的全國首屆感染病學術會議上，該院成軍教授和同行交流了通過基因克隆化對肝炎進行的一些研究。

病毒嗜肝特性從何而來

在人體的很多細胞中都能檢測到肝炎病毒，惟獨肝細胞此時顯得很脆弱，為什么會產生這種嗜肝特性呢?

大量研究資料表明肝細胞中的大分子環境，更加適合肝炎病毒的復制和表達，這些因素不是別的，就是肝細胞中特殊的蛋白質成分。

換句話說，病毒基因的復制和表達受到肝細胞中蛋白質因子的調節。要找到這些能影響病毒基因的蛋白質因子，可以有很多基因克隆化方法，其中酵母單雜交技術一方面可以克隆基因，而后還能用于研究被克隆基因的功能，因此具有重要應用前景。成教授等曾利用酵母單雜交技術篩選SP1(一種乙肝病毒基因啟動子)的結合蛋白，發現了一種由92個氨基酸殘基(aa)組成的新蛋白，命名為SP1啟動子的結合蛋白1(SBP1)，后證實SBP1對于SPI啟動子的轉錄活性具有顯著的抑制作用，是SPI啟動子的一種負調節因子。從而為研究SPI啟動子的轉錄調控，開辟了新的研究方向。

病毒怎么影響肝細胞

肝炎病毒蛋白在肝細胞中不是孤立存在的，肝炎病毒感染肝細胞之后，改變了細胞正常的分裂、增殖、凋亡的信號傳導途徑，這就是肝炎病毒引起各種類型慢性肝臟疾病的重要機制所在。如果肝炎病毒蛋白結合的蛋白屬于一種蛋白酶，那么就可能改變這種蛋白酶的活性;如果肝炎病毒蛋白結合的蛋白屬于一種底物，那么就會改變作為底物的性質。所以，從研究肝炎病毒蛋白結合蛋白的方面入手，是闡明其致病機理的重要突破口。

在研究肝炎病毒蛋白結合蛋白的多種技術中，酵母雙雜交技術經過這幾年的改進，效率顯著提高，假陽性率進一步降低，成為后基因組計劃中重要的技術平臺。

成教授等應用酵母雙雜交技術對于HBV、HCV肝炎病毒蛋白結合蛋白進行篩選，發現肝炎病毒蛋白結合蛋白的種類非常多。其中既有已知功能蛋白基因，也有未知功能蛋白基因。例如，經過研究發現HCV核心蛋白與載脂蛋白AI(APO-AI)和載脂蛋白AII(APO-AII)結合。根據這一結果，結合臨床上見到慢性丙型肝炎患者肝臟活檢組織的基本病理表現是肝脂肪變，因此考慮慢性丙型肝炎肝臟脂肪變的基本分子生物學機制很可能就是HCV核心蛋白與APO-AI、APO-AII之間的結合，干擾了肝細胞中正常的脂類代謝。

另外，經過研究還發現了一種新蛋白可以與HBV的前-S1蛋白結合，稱為HBV前-S1蛋白結合蛋白(PreS1BP)。需要指出的是，這里的基因克隆化已不再是簡單地對基因進行結構和序列的克隆，而發展

到從功能角度入手，找到與已知基因有相互作用的基因序列，然后再進行針對性的研究，即功能性克隆策略。通過這種功能性克隆策略，提示這種編碼基因實際存在的可能性，而且至少提示這種蛋白與HBV的前-S1蛋白能夠結合。HBV、HCV結合蛋白篩選的成功，拓寬了噬菌體表面展示技術的應用范圍，為研究蛋白-蛋白相互作用提供了一個高效的研究途徑。

如何找到反式激活靶基因

反式激活是指特殊蛋白質進入細胞后，可通過信號傳導促進或改變其他基因的表達。肝炎病毒蛋白對于肝細胞基因組表達的反式激活作用早已被人們廣泛認識，是與肝炎發生發展密切相關的重要分子生物學機制。

分子生物學技術的發展，為研究和克隆肝炎病毒蛋白反式激活基因提供了前所未有的機遇。抑制性消減雜交技術是目前較為成熟的克隆與發現反式激活新基因的不可替代的技術途徑，它不僅可以篩選得到功能已知的基因，還能篩選到功能未知的基因。因此，抑制性消減雜交技術在相當一段時間內具有廣泛的應用前景。