簡介

平板劃線法，平板劃線分離法是指把混雜在一起的微生物或同一微生物群體中的不同細(xì)胞用接種環(huán)在平板培養(yǎng)基表點(diǎn)擊此處添加圖片說明面通過分區(qū)劃線稀釋而得到較多獨(dú)立分布的單個(gè)細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)后生長繁殖成單菌落，通常把這種單菌落當(dāng)作待分離微生物的純種。有時(shí)這種單菌落并非都由單個(gè)細(xì)胞繁殖而來的，故必須反復(fù)分離多次才可得到純種。其原理是將微生物樣品在固體培養(yǎng)基表面多次作“由點(diǎn)到線”稀釋而達(dá)到分離目的的。

方式

劃線的形式有多種，可將一個(gè)平板分成四個(gè)不同面積的小區(qū)進(jìn)行劃線,第一區(qū)(A區(qū))面積最小，作為待分離菌的菌源區(qū)，第二和第三區(qū)(B、C區(qū))是逐級稀釋的過渡區(qū)，第四區(qū)(D區(qū))，則是關(guān)鍵區(qū)，使該區(qū)出現(xiàn)大量的單菌落以供挑選純種用。為了得到較多的典型單菌落,平板上四區(qū)面積的分配應(yīng)是D>C>B>A。

步驟

用接種環(huán)在平板培養(yǎng)基表面通過分區(qū)劃線而達(dá)到純化分離微生物的一種方法。是將微生物樣品在固體培養(yǎng)基表面多次作“由點(diǎn)到線”稀釋而達(dá)到分離的目的。用于目的微生物的分離。

特點(diǎn)

快捷、方便、便于得到目的性狀的單克隆。

示例

對大腸桿菌的分離

實(shí)驗(yàn)器材

大腸桿菌、枯草芽孢桿菌混合菌懸液

牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基

無菌培養(yǎng)皿，水浴鍋，接種環(huán)等。

實(shí)驗(yàn)步驟

1.融化培養(yǎng)基：牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基放入水浴中加熱至融化。

2.倒平板：待培養(yǎng)基冷卻至50℃左右，按無菌操作法倒2只平板(每皿約15m1)，平置，待凝固。

倒平板的方法：右手持盛培養(yǎng)基的試管或三角瓶置火焰旁邊，用左手將試管塞或瓶塞輕輕地?fù)艹觯嚬芑蚱靠诒３謱χ鹧?然后用右手手掌邊緣或小指與無名指夾住管(瓶)塞(也可將試管塞或瓶塞放在左手邊緣或小指與無名指之間夾住。如果試管內(nèi)或三角瓶內(nèi)的培養(yǎng)基一次用完，管塞或瓶塞則不必夾在手中)。左手拿培養(yǎng)皿并將皿蓋在火焰附近打開一縫，迅速例入培養(yǎng)基約15m1，加蓋后輕輕搖動(dòng)培養(yǎng)皿，使培養(yǎng)基均勻分布在培養(yǎng)皿底部，然后平置于桌面上，待凝后即為平板。

3.作分區(qū)標(biāo)記在皿底將整個(gè)平板劃分成A、B、C、D四個(gè)面積不等的區(qū)域。各區(qū)之間的交角應(yīng)為120℃左右(平板轉(zhuǎn)動(dòng)一定角度約60℃)，以便充分利用整個(gè)平板的面積，而且采用這種分區(qū)法可使D區(qū)與A區(qū)劃出的線條相平行，并可避免此兩區(qū)線條相接觸。

4.劃線操作

(1)挑取他含菌樣品：選用平整、圓滑的接種環(huán)，按無菌操作法挑取少量菌種。

(2)劃A區(qū)：將平板倒置于煤氣(酒精)燈旁,左手拿出皿底并盡量使平板垂直于桌面，有培養(yǎng)基一面向著煤氣燈(這時(shí)皿蓋朝上，仍留在煤氣燈旁)，右手拿接種環(huán)先在A區(qū)劃3—4條連續(xù)的平行線(線條多少應(yīng)依挑菌量的多少面定)。劃完A區(qū)后應(yīng)立即燒掉環(huán)上的殘菌，以免因菌過多而影響后面各區(qū)的分離效果。在燒接種環(huán)時(shí)，左手持皿底并將其覆蓋在皿蓋上方(不要放入皿蓋內(nèi))，以防止雜菌的污染。

(3)劃其他區(qū)：將燒去殘菌后的接種環(huán)在平板培養(yǎng)基邊緣冷卻一下，并使B區(qū)轉(zhuǎn)到上方，接種環(huán)通過A區(qū)(菌源區(qū))將菌帶到B區(qū)，隨即劃數(shù)條致密的平行線。再從B區(qū)作C區(qū)的劃線。最后經(jīng)C區(qū)作D區(qū)的劃線，D區(qū)的線條應(yīng)與A區(qū)平行，但劃D區(qū)時(shí)切勿重新接觸A、B區(qū)，以免極該兩區(qū)中濃密的菌液帶到D區(qū)，影響單菌落的形成。隨即將皿底放入皿蓋中。燒去接種環(huán)上的殘菌。

5.恒溫培養(yǎng)：將劃線平板倒置，于37℃(或28℃)培養(yǎng)，24hr后觀察。