概念

涂布平板法(spread plate method)，由于將含菌材料現(xiàn)加到還較燙的培養(yǎng)基中再倒平板易造成某些熱敏感菌的死亡，而且采用稀釋倒平臺法也會使一些嚴(yán)格好氧菌因被固定在瓊脂中間缺乏氧氣而影響其生長，因此在微生物學(xué)研究中更常用的純種分離方法是涂布平板法。

特征

稀釋平板計數(shù)是根據(jù)微生物在固體培養(yǎng)基上所形成的單個菌落，即是由一個單細(xì)胞繁殖而成這一培養(yǎng)特征設(shè)計的計數(shù)方法，即一個菌落代表一個單細(xì)胞。計數(shù)時，首先將待測樣品制成均勻的系列稀釋液，盡量使樣品中的微生物細(xì)胞分散開，使成單個細(xì)胞存在(否則一個菌落就不只是代表一個細(xì)胞)，再取一定稀釋度、一定量的稀釋液接種到平板中，使其均勻分布于平板中的培養(yǎng)基內(nèi)。經(jīng)培養(yǎng)后，由單個細(xì)胞生長繁殖形成菌落，統(tǒng)計菌落數(shù)目，即可計算出樣品中的含菌數(shù)。此法所計算的菌數(shù)是培養(yǎng)基上長出來的菌落數(shù)，故又稱活菌計數(shù)。一般用于某些成品檢定(如殺蟲菌劑等)、生物制品檢驗、土壤含菌量測定及食品、水源的污染程度的檢驗。

實驗器材

1.活材料：蘇云金芽孢桿菌(Bacillus thuringiensis)菌劑。

2.培養(yǎng)基：牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基

3.器材：90ml無菌水、9ml無菌水、無菌平皿、lml無菌吸管、天平、稱樣瓶、記號筆、玻璃刮鏟等。

實驗方法

1.樣品稀釋液的制備 準(zhǔn)確稱取待測樣品l0g，放入裝有90ml無菌水并放有小玻璃珠的250ml三角瓶中，用手或置搖床上振蕩20min，使微生物細(xì)胞分散，靜置20-30s，即成10-1稀釋液;再用1ml無菌吸管，吸取10-1稀釋液lml，移入裝有9ml無菌水的試管中，吹吸3次，讓菌液混合均勻，即成10-2稀釋液;再換一支無菌吸管吸取10-2稀釋液1ml，移入裝有9ml無菌水的試管中，也吹吸三次，即成l0-3稀釋液;以此類推，連續(xù)稀釋，制成10-4、10-5、10-6、10-7、10-8、10-9等一系列稀釋菌液。

用稀釋平板計數(shù)時，待測菌稀釋度的選擇應(yīng)根據(jù)樣品確定。樣品中所含待測菌的數(shù)量多時，稀釋度應(yīng)高，反之則低。通常測定細(xì)菌菌劑含菌數(shù)時，采用10-7、10-8、10-9稀釋度，測定土壤細(xì)菌數(shù)量時，采用10-4、10-5、10-6稀釋度，測定放線菌數(shù)量時，采用l0-3、10-4、10-5稀釋度，測定真菌數(shù)量時，采用10-2、10-3、10-4稀釋度。

2.平板接種培養(yǎng) 平板接種培養(yǎng)有混合平板培養(yǎng)法和涂抹平板培養(yǎng)法兩種方法。

(1)混合平板培養(yǎng)法 將無菌平板編上10-7、10-8、10-9號碼，每一號碼設(shè)置三個重復(fù)，用無菌吸管按無菌操作要求吸取10-9稀釋液各1ml放入編號10-9的3個平板中，同法吸取10-8稀釋液各lml放入編號10-8的3個平板中，再吸取10-7稀釋液各lml放入編號10-7的3個平板中(由低濃度向高濃度時，吸管可不必更換)。然后在9個平板中分別倒入已融化并冷卻至45—50℃的細(xì)菌培養(yǎng)基，輕輕轉(zhuǎn)動平板，使菌液與培養(yǎng)基混合均勻，冷疑后倒置，適溫培養(yǎng)。至長出菌落后即可計數(shù)。

(2)涂抹平板計數(shù)法 涂抹平板計數(shù)法與混合法基本相同，所不同的是先將培養(yǎng)基熔化后趁熱倒入無菌平板中，待凝固后編號，然后用無菌吸管吸取0.1ml菌液對號接種在不同稀釋度編號的瓊脂平板上(每個編號設(shè)三個重復(fù))。再用無菌刮鏟將菌液在平板上涂抹均勻，每個稀釋度用一個滅菌刮鏟，更換稀釋度時需將刮鏟灼燒滅菌。在由低濃度向高濃度涂抹時，也可以不更換刮鏟。將涂抹好的平板平放于桌上20—30min，使菌液滲透入培養(yǎng)基內(nèi)，然后將平板倒轉(zhuǎn)，保溫培養(yǎng)，至長出菌落后即可計數(shù)。