簡介

這是一種應用十分廣泛的天然培養基，其中的牛肉膏為微生物提供碳源、磷酸鹽和維生素，蛋白胨主要提供氮源和維生素，而NaCl提供無機鹽

牛肉膏 0.3g

蛋白胨 1g

氯化鈉 0.5g

瓊脂 2g

自來水 100mL

pH 7.0～7.2

滅菌 1.05kg/cm2，22min

倒平皿前加入制霉菌素(5000u/ml) 1ml至100ml培養基中(50u/ml)混勻，將培養基倒入平皿內約15ml/皿。

將另一部分培養基(不加制霉菌素)分裝試管(保種)，其裝量不超過試管高的1/4，滅菌后，排斜面，斜面長度不超過試管總長的一半。

配置步驟

1.稱量

按培養基配方比例依次準確地稱取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放入燒杯中。牛肉膏常用玻棒挑取，放在小燒杯或表面皿中稱量，用熱水溶化后倒入燒杯。也可放在稱量紙上，稱量后直接放入水中，這時如稍微加熱，牛肉膏便會與稱量紙分離，然后立即取出紙片。蛋白胨很易吸潮，在稱取時動作要迅速。另外，稱藥品時嚴防藥品混雜，一把牛角匙用于一種藥品，或稱取一種藥品后，洗凈、擦干，再稱取另一藥品，瓶蓋也不要蓋錯。

2.溶化

在上述燒杯中可先加入少于所需要的水量，用玻棒攪勻，然后，在石棉網上加熱使其溶解。待藥品完全溶解后，補充水分到所需的總體積。如果配制固體培養基，將稱好的瓊脂放入已溶化的藥品中，再加熱溶化，在瓊脂溶化的過程中，需不斷攪拌，以防瓊脂糊底使燒杯破裂。最后補足所失的水分。

3.調pH

在未調pH前，先用精密pH試紙測量培養基的原始pH值，如果pH偏酸，用滴管向培養基中逐滴加入1mol/L NaOH，邊加邊攪拌，并隨時用pH試紙測其pH值，直至pH達7.6。反之，則用1mol/L HCl進行調節。注意pH值不要調過頭，以避免回調，否則，將會影響培養基內各離子的濃度。 對于有些要求pH值較精確的微生物，其pH的調節可用酸度計進行(使用方法，可參考有關說明書)。

4.過濾

趁熱用濾紙或多層紗布過濾，以利結果的觀察。一般無特殊要求的情況下，這一步可以省去(本實驗無需過濾)。

5.分裝

按實驗要求，可將配制的培養基分裝入試管內或三角燒瓶內。分裝裝置見圖Ⅴ-1。 分裝過程中注意不要使培養基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。 (1)液體分裝分裝高度以試管高度的1/4左右為宜。 (2)固體分裝分裝試管，其裝量不超過管高的1/5，滅菌后制成斜面，如圖Ⅴ-2。分裝三角燒瓶的量以不超過三角燒瓶容積的一半為宜。 (3)半固體分裝試管一般以試管高度的1/3為宜，滅菌后垂直待凝。

6.加塞

培養基分裝完畢后，在試管口或三角燒瓶口上塞上棉塞，以阻止外界微生物進入培養基內而造成污染，并保證有良好的通氣性能(棉塞制作方法附本實驗后面)。

7.包扎

加塞后，將全部試管用麻繩捆扎好，再在棉塞外包一層牛皮紙，以防止滅菌時冷凝水潤濕棉塞，其外再用一道麻繩扎好。用記號筆注明培養基名稱、組別、日期。三角燒瓶加塞后，外包牛皮紙，用麻繩以活結形式扎好，使用時容易解開，同樣用記號筆注明培養基名稱、組別、日期。

8.滅菌

將上述培養基以1.05kg/cm2(15磅/英寸2)，121.3℃， 20分鐘高壓蒸汽滅菌。如因特殊情況不能及時滅菌，則應放入冰箱內暫存。

9.擱置斜面

將滅菌的試管培養基冷至50℃左右，將試管棉塞端擱在玻棒上，擱置的斜面長度以不超過試管總長的一半為宜。

10.無菌檢查

將滅菌的培養基放入37℃的溫室中培養24—48小時，以檢查滅菌是否徹底。